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在以往工作的基础上本研究对现有猪胚胎玻璃化冷冻保存技术进行了优化。以巴马小型猪为供体, 采用超数排卵技术, 采集5~6日龄的胚胎(囊胚/桑椹胚), 比较冷冻方法、胚胎承载工具胚胎、透明带处理和冷冻胚胎移植受体对猪胚胎冷冻效果的影响。结果表明, 冷冻方法I[胚胎首先在冷冻液1 (TCM199+20% FBS+10% EG+10% DMSO)中平衡 3 min, 然后立即转入冷冻液2 (TCM199+20%FBS+20%EG+20%DMSO+0.4 mol/L SUC)中并在1 min内装管(每管含2~6枚胚胎), 直接投入液氮保存]与冷冻方法II[透明带完整的胚胎在NCSU23(含7.5 mg/mL CB)培养液中平衡25 min, 13 000 ×g离心12~13 min, 然后在含2 mol/L EG的NCSU23中平衡5 min, 再在含8 mol/L EG+7% PVP的NCSU23中快速漂洗, 装进OPS/GMP管, 放入液氮保存]冷冻效果没有显著差异; GMP法能显著提高冷冻胚胎存活率(83.8% vs 77.6%, P < 0.05)和囊胚细胞数(47.5 vs 53.1, P < 0.05); 以0.5%链蛋白酶(Pronase)处理透明带10 s, 虽然对猪胚胎存活率没有显著影响, 但能显著提高囊胚细胞数(60.1 vs 46.6, P < 0.01); 以地方猪种(枫泾母猪)为冷冻胚胎移植受体能显著提高妊娠率和胚胎效率(P

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《猪胚胎玻璃化冷冻保存技术的优化》

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文件号：090869

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