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利用大肠杆菌表达系统可溶性表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白, 经过纯化和重组装过程获得HPV18病毒样颗粒(VLPs), 研究其免疫原性和诱发中和抗体生成的水平。首先, 提取HPV18的基因组DNA, 通过PCR扩增获得HPV18 L1基因片段, 将其插入pTrxFus表达载体, 在大肠杆菌中可溶性表达HPV18 L1蛋白; 其次, 通过硫酸铵沉淀、离子交换层析和疏水相互作用层析获得高纯度的HPV18 L1蛋白, 而后透析去除预先加入的还原剂DTT, 使HPV18 L1蛋白自发组装成VLPs; 最后, 通过动态光散射技术和透射电子显微镜鉴定HPV18 VLPs的大小和形态, 利用假病毒细胞中和实验评价HPV18 VLPs在实验动物体内的免疫原性和中和抗体生成水平。结果表明, HPV18L1蛋白可以在大肠杆菌表达系统中以可溶形式表达, 经过纯化的HPV18L1蛋白可以自发组装成为半径约为29.34 nm、与HPV病毒外观相似的VLP。该VLPs在小鼠体内的中和抗体半数有效剂量为0.006 mg, 在兔及山羊体内诱导中和抗体滴度高达107。总之, 本研究利用原核表达系统可简便高效地获得具有高度免疫原性的HPV18 VLPs, 为HPV18预防性疫苗的开发奠定了基础, 具有重要的应用意义。

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《人乳头瘤病毒18型病毒样颗粒在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析》

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文件号：090867

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