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本研究利用易错PCR技术突变假密环菌Armillariella tabescens MAN47 β-甘露聚糖酶野生型基因, PCR产物与大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体pYCα上连接, 在大肠杆菌DH5α中扩增后电转入酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae, 构建了库容为104的初级突变体库, 筛选得到耐高温最佳突变株M262。DNS法测得80oC处理30 min后最大酶活力为25 U/mL, 较之野生型最适条件酶活力提高了4.3 倍。序列分析表明, 突变体有3 个碱基发生了突变: T343A/ C827T/ T1139C,相应的氨基酸改变为Ser115Thr/Thr276Met/Val380Ala, 利用SWISS-MODEL数据库同源建模显示, 这3 个突变氨基酸分别位于第4 个β折叠的第6 个氨基酸、第6 个α螺旋的第1 个氨基酸、第10 个α螺旋和第11 个β折叠之间的转角。

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《基于易错PCR的假密环菌Armillariella tabescens MAN47 b-甘露聚糖酶耐高温定向进化》

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文件号：091267

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