诺卡氏菌酰胺酶基因的分子克隆及在大肠杆菌中表达的初步研究

时间:2023-09-17 13:36:40
作者:许幂1 于慧敏2* 谭天伟1 朱燕勤2 沈忠耀2
关键字:诺卡氏菌,酰胺酶基因,分子克隆
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酰胺酶是一种重要的工业酶。利用生物信息学手段,在和已知酰胺酶基因序列分析比对的基础上,首次从Ncordia sp. YS-2002中成功地克隆得到酰胺酶基因ami,并对其基因序列及氨基酸序列的性质进行了分析。结果表明,所得酰胺酶基因ami片段大小共为1446bp,由启动子区、阅读框和回文结构终止区三部分构成。序列分析和进化树分析表明,Ncordia sp. YS-2002 酰胺酶是一种比较特殊的酰胺酶,不含大多数酰胺酶共同具有的保守区序列。进一步将酰胺酶基因连接到pET28a(+)上,转入大肠杆菌BL21(DE3)中筛选获得重组菌株PEAB。酶活测定结果表明:重组菌具有酰胺酶酶活,但较低,其原因可能是因为大量表达的产物主要以包涵体的形式存在。

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诺卡氏菌酰胺酶基因的分子克隆及在大肠杆菌中表达的初步研究
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