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应用定向进化技术提高了嗜热拟青霉Paecilomyces thermophila J18耐热β-1,3-1,4-葡聚糖酶 (PtLic16A) 在酸性条件下的催化能力。结合易错PCR和DNA改组的方法，构建了β-葡聚糖酶的突变体文库；利用刚果红染色法建立了阳性克隆的高通量筛选体系。筛选得到的突变酶PtLic16AM1的反应最适pH由7.0变化至5.5，且保持了原有的耐热性和比酶活。突变酶的DNA序列中有4个点位发生突变，引发了4处氨基酸替换，分别是T58S、Y110N、G195E和D221G。结构模拟结果显示，发生突变的4个氨基酸位点中，Y110N位置靠近酶活性中心，而T58S、G195E和D221G则离酶活性中心较远，其中T58S、G195E可能对酶最适pH的变化起到了关键作用。

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《定向进化提高嗜热拟青霉J18耐热β-1,3-1,4-葡聚糖酶在酸性条件下的催化能力》

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文件号：089647

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