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STK1基因是玉米大斑病菌调控分生孢子发育、渗透胁迫调节和致病性的重要MAPK基因。本文首先构建了含有增强型绿色荧光蛋白基因 (EGFP) 的毕赤酵母GSS115 (Pichia pastoris GS115) 表达载体pPIC3.5K-EGFP，再以玉米大班病菌模式菌株01-23的菌丝cDNA为模板，PCR扩增STK1基因，克隆到pPIC3.5K-EGFP，构建了STK1-EGFP融合基因的GS115表达载体pPIC3.5K-STK1-EGFP。利用电击转化法将该融合基因表达载体转化到GS115感受态细胞内，利用MD培养基筛选、PCR鉴定，获得了STK1-EGFP融合基因的毕赤酵母转化子。通过RT-PCR和荧光观察，发现STK1基因和EGFP基因均可以高效稳定地表达。另外，在试验中我们还发现，在STK1基因起始密码子前加入Kozak序列可以使STK1-EGFP融合基因的表达强度增强4.8倍。以上研究结果为STK1基因表达蛋白的亚细胞功能定位和抗体制备奠定了基础。

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《玉米大斑病菌STK1与EGFP融合基因载体的构建及其在毕赤酵母中的表达》

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文件号：088214

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