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利用毕赤酵母密码子偏好性优化合成球毛壳菌α-葡聚糖酶基因，并在毕赤酵母GS115中实现异源表达。通过高拷贝筛选和摇瓶发酵条件的单因素优化，重组α-葡聚糖酶的酶活力由初始的2.692 U/mL提高至47.915 U/mL。选择 Hitrap Q HP 和Hitrap SP HP 的双步层析分离将发酵粗酶液纯化至电泳纯，纯化倍数40.83，比活达277.61 U/mg，回收率为24.15%。纯酶最适温度和pH分别为60 ℃和5.5。在20~50 ℃和pH为4.5~8.5范围内稳定性良好，浓度为10 mmol/L的Fe2+对酶有激活作用，Cu2+浓度（0.1~10 mmol/L）越高对酶的抑制作用越强。酶动力学实验发现该重组酶对高相对分子质量的底物亲和力更高，葡聚糖T2000为该酶的最适底物。

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《球毛壳菌α-葡聚糖酶的异源表达、纯化及特性表征》

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文件号：301637

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