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N-乙酰-D-葡萄糖胺-2-差向异构酶（AGE）是合成N-乙酰-D-神经氨酸（Neu5Ac）的关键酶。该酶的高效表达是提高全细胞细胞催化法合成Neu5Ac的有效途径。根据集胞藻（Synechocystis sp. PCC 6803）AGE编码基因slr1975序列信息和大肠杆菌密码子偏好性，优化密码子并人工合成目的基因序列slr975-co。将该基因克隆到表达载体pET28a中，构建了重组大肠杆菌BL21（DE3）/pET28-slr并实现了目的基因的诱导表达。SDS-PAGE分析表明，重组蛋白质的相对分子质量在43 000左右，与预期大小一致，纯化产物蛋白质质量浓度约为1.7 g/L。重组AGE的最适反应温度为42 ℃，最适反应pH为6.0。AGE对GlcNAc、ManNAc的Km值分别为39.0、46.5 mmol/L。以分别表达AGE和N-乙酰神经氨酸裂合酶（NanA）的重组大肠杆菌作为催化剂，以N-乙酰-D-葡萄糖胺为底物，实现了N-乙酰-D-神经氨酸的全细胞催化合成。结果表明，对AGE密码子进行优化实现了该基因在大肠杆菌中的高效表达，为全细胞催化法高效合成N-乙酰-D-神经氨酸奠定了坚实的基础。

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《N-乙酰-D-葡萄糖胺-2-差向异构酶基因的克隆及表达》

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文件号：301039

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