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规律性短重复回文序列簇(CRISPR)和 CRISPR 辅助蛋白 9(Cas9)构成的 CRISPR/Cas9 基因编辑技术快速推进了基因修饰猪作为医学研究模式动物的广泛应用。而高效的靶基因单链向导 RNA(sgRNA)是利用 CRISPR/Cas9 技术进行基因编辑成功的关键,对于猪等繁殖周期较长的大动物,则需要在实施动物实验前,在体外筛选出高效的 sgRNA 以避免时间和资源成本浪费。另外,如何高效获得阳性基因编辑单克隆细胞是目前尚待解决的难题。本研究建立了靶向猪基因组的 sgRNA 快速筛选方法,利用荧光载体富集基因编辑细胞,同时探索利用图案微阵列培养技术快速获得单克隆细胞的方法,在此基础上高效获得延胡索酰乙酰乙酸酶(Fah)基因编辑细胞,为后续生产作为人类肝细胞生物反应器的Fah基因敲除猪奠定基础。
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《靶向猪基因组单链向导RNA快速筛选以及利用图案微阵列收获单克隆细胞的研究》
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文件号:126914
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