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目的 筛选平沙绿僵菌Metarhizium pingshaense侵染条件下筛胸梳爪叩甲Melanotus cribricollis幼虫稳定表达的内参基因，为该竹林金针虫相关基因的表达研究奠定基础。 方法 基于筛胸梳爪叩甲幼虫的转录组数据，利用实时荧光定量PCR扩增特异性引物，分析相关性和扩增效率；利用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件评估筛选出6个候选内参基因(β-actin、GAPDH、α-tubulin、RPL13α、RPS3、RPS27a)，并验证其表达稳定性。 结果 GeNorm分析结果显示：PRS27a和RPS3的表达最稳定，随后依次是α-tubulin、RPL13α、β-actin和GAPDH；最适合的内参基因数目为2。NormFinder分析结果显示：RPL13α的表达最稳定，随后依次是α-tubulin、RPS3、RPS27a、β-actin和GAPDH。BestKeeper分析结果显示：β-actin和GAPDH的P＞0.5，不适合作为本试验条件下的内参基因。不同软件分析得出的候选内参排序存在一定差异。综合分析和表达稳定性验证表明PRS27a或RPS3是最佳内参基因，6个目的基因的表达水平变化趋势均基本一致。 结论 PRS27a和RPS3是研究平沙绿僵菌侵染的竹林金针虫相关基因表达的最佳内参基因。图3表3参27

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《竹林金针虫实时荧光定量PCR内参基因的筛选与应用》

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文件号：105478

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