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根据毕赤酵母密码子偏爱性, 不改变毒素蛋白质一级结构, 设计合成了昆虫神经毒素LqhIT2基因, 并分别克隆至大肠杆菌融合表达载体pPET30-a(+)和毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K。在IPTG的诱导下, 神经毒素在大肠杆菌中融合表达, 表达产物经镍亲和层析纯化后, 用于免疫BALB/c小鼠, 制备了特异性较高的抗血清, 抗体滴度超过1:128 000。利用制备的抗血清, 采用斑点杂交, 筛选得到了较高水平分泌表达重组LqhIT2的酵母转化子, 摇甁条件下,毒素表达量约9 mg/L。大肠杆菌表达产物没有生物活性, 酵母表达产物经注射蝗虫表现出杀虫活性。

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《昆虫神经毒素LqhIT2的表达、抗血清制备及活性分析》

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文件号：092029

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