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为研究重组七鳃鳗细胞毒素蛋白rLj-RGD3的抗肿瘤活性, 确定其生物学地位及意义, 本研究提取成体七鳃鳗(Lampetra japonica)口腔腺组织总RNA, 经RT-PCR获得cDNA序列长度为357 bp的目的基因片段, 将其克隆于 pET23b载体, 获得带有组氨酸标签的分子量为15 kD的基因重组蛋白rLj-RGD3的高效可溶性表达，通过组氨酸亲和层析纯化蛋白。采用MTT法检测不同浓度rLj-RGD3对bFGF诱导下的Hela细胞增殖的抑制作用, 结果表明rLj-RGD3 能显著抑制Hela细胞的增殖, IC50为2.6 mmol/L。rLj-RGD3作用后的Hela细胞经Hoechst染色及DNA ladder检测结果显示, 细胞均发生凋亡。rLj-RGD3对Hela细胞黏附玻连蛋白(VN)作用的实验结果为有效抑制。采用Transwell细胞培养板对bFGF诱导下的Hela细胞迁移实验表明, rLj-RGD3能够抑制Hela细胞的迁移, 且抑制率达60%。采用人工基质膜基质Matrigel及Transwell模仿体内环境研究rLj-RGD3对Hela细胞浸润行为实验显示, 以bFGF为趋化剂的Hela细胞穿透Matrigel的浸润行为明显受到抑制。以上研究表明, rLj-RGD3具有典型的RGD毒素蛋白的功能, 有望应用于抗肿瘤基因工程药物开发, 具有重要的生物学意义。

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《重组七鳃鳗细胞毒素蛋白rLj-RGD3表达及对Hela细胞活性的影响》

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文件号：090761

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