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为了提高华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶的热稳定性，运用定向进化-易错PCR的方法，经两轮易错PCR引入突变，利用fast-blue RR顶层琼脂法对突变文库进行筛选，第一轮易错PCR后筛选到2株突变菌株，第二轮筛选到4株突变株。第二轮最佳突变株Ep2-4，其中3个氨基酸发生了突变：A129S、P168L和V329A。该突变酶ep2-4在60 ℃下半衰期相对原始酶r27RCL提高5.4倍，T50值提高7.8 ℃。酶学性质研究表明，突变酶ep2-4在热稳定性提高的基础上，仍保有良好的催化活性。蛋白质三维结构模拟显示，突变A129S可以和Gln133形成氢键，增加了酶表面的亲水性和极性；P168L可以与邻近的Leu164形成疏水键，导致突变酶的热稳定性提高。

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《易错PCR提高华根霉脂肪酶的热稳定性》

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文件号：088913

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