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微生物果糖基转移酶能够以蔗糖为底物产生低聚果糖。为获得更多新酶资源，通过PCR法成功地克隆出黑曲霉QU10的果糖基转移酶基因（GenBank Accession No. KF699529），基因片段长度为1 941 bp，包含一个54 bp的内含子。进一步利用RT-PCR法克隆了果糖基转移酶的cDNA，其编码628个氨基酸。将所得片段定向克隆到pET-22b、pGAPZA及pGAPZαA载体，并转化至大肠杆菌或毕赤酵母中，通过筛选获得果糖基转移酶表达活力高的转化子。利用α信号肽的毕赤酵母转化子获得最高果糖基转移酶胞外酶活力为431 U/mL，是原始菌株酶活力的35倍。此毕赤酵母重组酶为同源二聚体，半天然PAGE表观分子量约200 kDa。以蔗糖为底物，果糖基转移酶在pH 5.0、45 ℃下反应4 h，酶解产物中主要是蔗果三糖和四糖，蔗果寡糖最高可占总质量的58%。结果表明，果糖基转移酶酵母工程菌具有很高的转果糖基的能力，而且表达活力高，具有潜在的工业应用价值。

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《黑曲霉QU10果糖基转移酶的克隆表达》

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文件号：088458

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