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为解决三孢布拉霉转化过程中原生质体转化率低、孢子细胞壁厚难以导入外源载体等问题，本研究中构建了根癌农杆菌侵染原生质体的转化体系，同时克隆了与非同源末端连接修复途径相关的ku80基因，并将该转化体系应用于ku80的敲除中。将ku80基因敲除框插入双元载体pDHt-sk上构建了重组敲除载体pDH-85H3，通过化学转化法将敲除载体pDH-85H3导入根癌农杆菌LBA4404，并基于农杆菌介导法转化三孢布拉霉原生质体。结果表明，经潮霉素筛选和 PCR 鉴定，得到的20株转化子中，有18株的基因组插入了敲除框，转化率达90%。经鉴定有2株转化子发生了同源重组，敲除率为10%。该结论表明了根癌农杆菌介导三孢布拉霉原生质体转化技术的可行性。

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《三孢布拉霉遗传转化体系的构建及应用》

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文件号：301609

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