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为了解决亚油酸异构酶（Linoleic Acid Isomerase，PAI）在大肠杆菌中形成包涵体的问题，选择麦芽糖结合蛋白（Maltose-Binding Protein，MBP）标签和低温诱导表达系统pColdV，构建了大肠杆菌重组表达菌株E.coli BL21(pCold-Mpai)，并对其诱导表达条件进行了优化。SDS-PAGE电泳结果显示，融合蛋白MBP-PAI成功表达，重组菌的最佳诱导表达条件为：诱导温度15 ℃、IPTG添加量0.1 mmol/L 、诱导时间12 h，在该诱导条件下，与未融合MBP的PAI相比，MBP-PAI的可溶性表达量为后者的18倍、酶活为后者的1.5倍。经过 MBPTrap HP亲和层析柱纯化后，MBP-PAI纯蛋白质的比酶活为1.58 U/mg，能够转化亚油酸形成反10，顺12-共轭亚油酸。

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《重组融合蛋白MBP-PAI的表达、纯化及酶活测定》

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文件号：301358

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