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摘要： 旨在建立西门塔尔牛表皮干细胞(epidermal stem cell，EpSCs)分离培养体系，探究其生物学特性，为西门塔尔牛种质资源保存提供新方法，为干细胞治疗研究提供种子细胞。采用3～4月龄西门塔尔牛背部表皮，通过酶消化法和组织贴壁法两种方法分离培养西门塔尔牛EpSCs，绘制EpSCs生长曲线探讨其增殖能力。通过免疫荧光鉴定EpSCs表面标记物(ITG β1、P63和CD71)，通过RT-PCR分析EpSCs特异性基因(ITG β1、KRT19和ITG α6)表达情况。通过体外诱导EpSCs分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞检测其分化潜能。结果显示，组织块贴壁法获得的EpSCs纯度较低，酶消法获得的EpSCs纯度较高，细胞传代至P28代时开始逐渐老化。EpSCs细胞生长曲线呈“S”型。免疫荧光结果显示EpSCs表面特异性标记物ITG β1、P63和CD71呈阳性表达，RT-PCR结果显示EpSCs高度表达ITG β1、KRT19和ITG α6，不表达CD31基因。EpSCs诱导分化脂肪细胞时，产生可被油红O着色的脂滴，经鉴定细胞阳性表达脂肪细胞PPAR-γ和LPL特异性基因。EpSCs诱导分化成骨细胞时，形成可被茜素红染色呈橙红色的钙结节，且细胞阳性表达CollagenⅠ和RUNX2基因。EpSCs诱导分化软骨细胞时，透明状软骨基质经阿利新蓝染色呈蓝色，且细胞阳性表达软骨细胞特异性基因BGN和CollagenⅡ。上述结果表明，成功从西门塔尔牛胎牛表皮中分离得到生长状态良好的西门塔尔牛EpSCs，且具有向脂肪、成骨和软骨细胞等中胚层细胞分化的潜能，建立了西门塔尔牛EpSCs体外分离培养体系。

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《西门塔尔牛表皮干细胞的分离培养与生物学特性研究》

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文件号：127473

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