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从香茶菜属植物细锥香茶菜中分离得到的二萜类化合物Rabdocoetsin B(Rabd-B), 研究其对人类t(8;21)白血病细胞凋亡的诱导作用及其对蛋白酶体19S泛素识别亚基S6’(Rpt5)的抑制作用, 为Rabd-B应用于t(8;21)白血病治疗提供实验依据。以不同浓度的Rabd-B处理t(8;21)白血病Kasumi-1细胞, 应用CCK-8法检测细胞活力, 用Bliss法计算IC50值, 通过流式细胞术检测细胞凋亡情况, 并以稳定表达pGC-E1-ZU1-GFP的A549细胞作为蛋白酶体抑制剂筛选模型, 荧光显微镜成像拍照GFP荧光。Western blotting检测不同浓度的Rabd-B处理Kasumi-1, 检测Casp-3、S6’(Rpt5)、PARP、ubiqutin在该细胞内的表达变化。结果显示, Rabd-B明显抑制t(8;21)阳性的Kasumi-1细胞生长, 48 h的IC50值为1.27 mmol/L; 同时诱导Kasumi-1细胞凋亡效果显著; 荧光显微镜观察药物处理和未处理的pGC-E1-ZU1-GFP的A549细胞Ub-GFP表达, 结果显示GFP平均荧光值随药物浓度增高而增强; Rabd-B处理Kasumi-1细胞24、48 h后蛋白质免疫印迹技术检测Casp-3、PARP, 发现Casp-3激活, 其底物PARP发生切割产生85 kD的降解带; 2.5、5.0 mmol/L Rabd-B处理Kasumi-1细胞24、48 h后Western blotting检测蛋白酶酶体组分, 发现19S调节亚基S6’(Rpt5)降解, 细胞内泛素化水平增高。以上结果说明, Rabd-B一方面通过激活Caspase级联反应, 另一方面抑制蛋白酶体19S泛素识别亚基, 导致细胞内泛素化积累, 进而抑制t(8; 21)白血病细胞生长并诱导其凋亡。
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