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重组F1-V融合蛋白 (rF1-V) 是目前在进行临床研究的鼠疫亚单位疫苗的主要成分。本研究摸索了rF1-V的可溶表达条件，并对条件进行了优化和放大，确定的中试发酵工艺为：在重组菌对数生长期中期加入50 μmol/L IPTG，25 ℃诱导表达5 h。通过硫酸铵分级沉淀、离子交换、疏水相互作用层析和凝胶过滤四步纯化，最终得到纯度为99%、回收率大于20%且各项检测指标合格的蛋白。在此基础上，将蛋白使用氢氧化铝佐剂进行吸附，在小鼠体内进行了免疫原性研究。ELISA测定两次皮下免疫后血清的抗体滴度。比较融合蛋白免疫组 (rF1-V) 与单一抗原免疫组 (rF1、rV) 以及联合抗原免疫组 (rF1+rV) 之间体液免疫反应的差异。结果显示：20 μg rF1-V免疫剂量组诱导的抗F1抗体滴度明显高于其他组，抗V抗体滴度与其他组相比没有显著差异。表明本工艺制备的rF1-V抗原有望作为鼠疫亚单位疫苗的主要组分。

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《中试规模纯化重组鼠疫rF1-V融合蛋白及其免疫原性分析》

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文件号：088290

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